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人結(jié)腸癌細(xì)胞株培養(yǎng)操作步驟

原載自:m.diomay.cn[技術(shù)資料頻道]  2017-09-22  瀏覽次數(shù):2064

   人結(jié)腸癌細(xì)胞株是一種成團(tuán)、貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,如果狀態(tài)好的情況下,生長(zhǎng)非常快,細(xì)胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形.在低濃度時(shí),此細(xì)胞長(zhǎng)梭型(不好描述),高濃度時(shí)長(zhǎng)成一張地毯,后者才是狀態(tài)的。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株培養(yǎng)操作步驟:
  1.人結(jié)腸癌細(xì)胞株細(xì)胞用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
  2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
  3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
  4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
  5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株注意事項(xiàng):
  1、觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。
  2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
  3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。
  4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)及時(shí)與我們。

 

 

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