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技術(shù)文章 / article
ATCC細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)步驟
原載自：[技術(shù)資料頻道] 2017-12-21 瀏覽次數(shù)：2204
ATCC細(xì)胞系作為正常或腫瘤組織的模式細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開(kāi)發(fā)，然而很大一部分的細(xì)胞系被錯(cuò)誤標(biāo)記或被其它個(gè)體、組織、種系來(lái)源的細(xì)胞所替代，由于科學(xué)界無(wú)法解決此類問(wèn)題以致大量因使用錯(cuò)誤鑒定的細(xì)胞系而導(dǎo)致誤導(dǎo)或存在潛在錯(cuò)誤的學(xué)術(shù)論文發(fā)表。通過(guò)近年來(lái)的努力而開(kāi)發(fā)出的STR分型方法已成為對(duì)人源細(xì)胞進(jìn)行鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法，STR分型的應(yīng)用成為*細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定這一問(wèn)題的重要一步。
ATCC細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備培養(yǎng)基；北美胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．ATCC細(xì)胞系的菌種處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
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