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ATCC細胞系的細胞培養(yǎng)步驟

原載自:m.diomay.cn[技術(shù)資料頻道]  2017-12-21  瀏覽次數(shù):2457

   ATCC細胞系作為正?;蚰[瘤組織的模式細胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā),然而很大一部分的細胞系被錯誤標(biāo)記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代,由于科學(xué)界無法解決此類問題以致大量因使用錯誤鑒定的細胞系而導(dǎo)致誤導(dǎo)或存在潛在錯誤的學(xué)術(shù)論文發(fā)表。通過近年來的努力而開發(fā)出的STR分型方法已成為對人源細胞進行鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法,STR分型的應(yīng)用成為*細胞錯誤鑒定這一問題的重要一步。
  ATCC細胞系的細胞培養(yǎng)步驟:
  一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
  1)準(zhǔn)備培養(yǎng)基;北美胎牛血清,10%;雙抗1%。
  2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
  3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
  二.ATCC細胞系的菌種處理:
  1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
  2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 

 

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