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技術(shù)文章 / article
ATCC細(xì)胞冷凍保存方法
原載自：m.diomay.cn[技術(shù)資料頻道] 2018-02-24 瀏覽次數(shù)：2653
ATCC細(xì)胞通常保存在凍存管中用干冰運(yùn)輸，或是在培養(yǎng)瓶中常溫運(yùn)輸。但對(duì)于中國(guó)客戶，由于運(yùn)輸時(shí)間稍長(zhǎng)，都是采用干冰運(yùn)輸?shù)姆绞健?div> 在收到凍存細(xì)胞后，很重要的一點(diǎn)是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養(yǎng)基中。如果做不到上面這點(diǎn)，需將細(xì)胞存儲(chǔ)在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在高于-130℃的溫度下，這會(huì)使細(xì)胞存活率迅速下降。
ATCC細(xì)胞注意事項(xiàng)：
?。?）欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好（logphase）且存活率高之狀態(tài)，約為80–90％致密度。
?。?）冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
?。?）注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，無(wú)菌且無(wú)色（以0.22micron FGLP flon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650），以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。
ATCC細(xì)胞冷凍保存方法：
（1）傳統(tǒng)方法：冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16～18小時(shí)（或隔夜）→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
?。?）程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
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