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ATCC細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧

原載自:m.diomay.cn[技術(shù)資料頻道]  2018-04-24  瀏覽次數(shù):2740

  ATCC細(xì)胞系液體培養(yǎng)基的保存要冷藏,因為液體培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時,其溶液的pH值會發(fā)生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。
  ATCC細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧:
  1. 買細(xì)胞要去靠譜的地方買,比如 ATCC 或者斯信生物。一般上面會有針對細(xì)胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。
  2. 不管是買的細(xì)胞,還是別人惠贈的細(xì)胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天zui 好更換一次培養(yǎng)基。
  3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時。污染、污染很容易發(fā)現(xiàn),支原體污染的話,細(xì)胞會長的慢,可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。
  4. 不同細(xì)胞生長周期不同。有的生長很快,比如說 MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢,比如 BT474,傳代是一分二,復(fù)蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索。
  5. 對于嬌弱的細(xì)胞,就得細(xì)心呵護。胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉(zhuǎn)速和時間。每天都要去看一下細(xì)胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。記住,是每天。
  ATCC細(xì)胞系注意事項:
  1)操作前要洗手,進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
  2)點燃酒精燈,操作在火焰附近進(jìn)行,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
  3)操作動作要準(zhǔn)確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。
  4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。
  5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
  6)吸溶液的吸管等不能混用。

 

 

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