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【產(chǎn)品推介】MSI標(biāo)準(zhǔn)品

原載自:m.diomay.cn[技術(shù)資料頻道]  2021-04-01  瀏覽次數(shù):2310

微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(Microsatellite Instability,MSI),是指由于在DNA復(fù)制時(shí)插入或缺失突變引起的微衛(wèi)星(Microsatellite,MS)序列長度改變的現(xiàn)象,常由錯(cuò)配修復(fù)功能(Mismatch repair,MMR)缺陷引起。MS序列,是一些短而重復(fù)的DNA序列,一般由1~6個(gè)核苷酸組成,串聯(lián)重復(fù)排列,常見類型為雙堿基CA/GA/GT或單堿基A/T等。MS序列可以位于基因的重要非編碼區(qū),也可以位于基因的編碼區(qū),多態(tài)性分布于整個(gè)基因組,個(gè)體差異大。MSI現(xiàn)象于1993年被Jacobs等人在結(jié)直腸癌中*發(fā)現(xiàn),與癌癥發(fā)生有關(guān),可以用于癌癥檢測。

 

 

 MSI檢測方法

 

MSI常由MMR基因突變及功能缺失導(dǎo)致。因此,在檢測癌細(xì)胞中的MSI時(shí),既可以通過檢測MMR基因缺失來確定是否發(fā)生MSI,如依賴于免疫組化技術(shù)的蛋白水平檢測,也可以直接檢測MSI的序列變化,如PCR(聚合酶鏈反應(yīng))檢測等的分子水平檢測。 

  

(一)免疫組化方法

免疫組化方法(Immunohistochemistry, IHC):采用免疫組織化學(xué)方法檢測腫瘤組織中錯(cuò)配修復(fù)基因MLH1、MSH2、MSH6及PMS2的表達(dá)。任何一項(xiàng)錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)缺失,被定義為MSI,否則即為微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)。其中一個(gè)表達(dá)缺失則稱為低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-L),2種或2種以上蛋白表達(dá)缺失為高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-H)。

 

(二)分子水平的檢測

1.聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)技術(shù)
目前主要采用多重?zé)晒釶CR結(jié)合毛細(xì)管電泳的方法。通過PCR方法檢測特異的微衛(wèi)星重復(fù)序列擴(kuò)增判定MSI狀態(tài),比較腫瘤患者的標(biāo)本組織與正常組織的位點(diǎn)突變情況。其比較的位點(diǎn)為美國國家癌癥研究所(NCI)推薦的5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn):BAT25、BAT26、D5S346、D2S123及D17S250。其中≥2個(gè)位點(diǎn)發(fā)生改變判定為高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-H),僅1個(gè)位點(diǎn)發(fā)生改變判定為低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-L),無位點(diǎn)改變判定為微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)。有研究認(rèn)為,二核苷酸重復(fù)序列的特異性和靈敏度比單核苷酸重復(fù)序列要低,因此關(guān)于MSI檢測的位點(diǎn)仍存在爭議。Bacher等對266個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)(其中包括單核苷酸、二核苷酸、四核苷酸以及五核苷酸微衛(wèi)星位點(diǎn))檢測的敏感性及準(zhǔn)確性進(jìn)行評估,提出了Promega分析系統(tǒng),該系統(tǒng)使用五個(gè)單核苷酸微衛(wèi)星位點(diǎn)(BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24和MONO-27)及兩個(gè)五核苷酸微衛(wèi)星位點(diǎn)(Penta C和Penta D)檢測MSI。大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí),MMR免疫組化檢測結(jié)果與MS的PCR檢測結(jié)果有高度關(guān)聯(lián)性,靈敏度92%,特異性可達(dá)100%。

2.新一代測序方法(Next Generation Sequencing, NGS)
NGS又稱為第二代測序技術(shù),是一種高通量測序技術(shù),能一次性對幾十萬到幾百萬條基因分子進(jìn)行序列測定。目前NGS方法已經(jīng)成為檢測MSI的新工具,其優(yōu)勢是可以實(shí)現(xiàn)多位點(diǎn)高通量檢測。紀(jì)念斯隆·凱特琳癌癥研究中心(Memorial Sloan Kettering Cancer Center,MSK)的一項(xiàng)研究使用NGS方法對12,288例實(shí)體瘤病人進(jìn)行檢測,判定MSI狀態(tài),并用MSI-PCR/MMR-IHC進(jìn)行了驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)證明, NGS方法較MSI-PCR方法具有更高的敏感性。

 

科佰生物可以提供MSI的診斷標(biāo)準(zhǔn)品,保證診斷方法的檢測限、靈敏度、穩(wěn)定性。

 

1

    MSS-P1(1.92%) Reference Standard CBP80002-1

 

圖片

 

 

2

    MSS-P2 Reference Standard CBP80002-2

 

 

圖片

 

3

    MSS-P3 Reference Standard CBP80002-3

 

圖片

 

 

4

    MSS-P4(1.92%) Reference Standard CBP80002-4

 

圖片

 

 

5

    MSI-H-U1(100%) Reference Standard CBP80002-5

 

圖片

 

 

6

    MSI-H-U2(98.08%) Reference Standard CBP80002-6

 

圖片

 

 

7

    MSI-H-U3 Reference Standard CBP80002-7

 

圖片

 

 

8

    MSI-H-U4(90.38% Reference Standard

 CBP80002-8

 

圖片

 

 

9

    MSI-H-U5(94.23%) Reference Standard CBP80002-9

 

圖片

 

 

10

    MSI-H-U6 Reference Standard CBP80002-10

 

圖片

 

 

11

    MSI-H-U7 Reference Standard CBP80002-11

 

圖片

 

 

12

    MSI-H-U8 Reference Standard CBP80002-12

 

圖片

 

 

 

 

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