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細(xì)胞株開(kāi)發(fā)的主要過(guò)程要知道

原載自:m.diomay.cn[技術(shù)資料頻道]  2022-10-14  瀏覽次數(shù):1377

   細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)細(xì)胞中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的細(xì)胞。一般認(rèn)為,細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
  細(xì)胞株開(kāi)發(fā)是抗體藥物CMC的起點(diǎn)和基礎(chǔ),細(xì)胞株的好壞直接決定生產(chǎn)成本、工藝復(fù)雜度和產(chǎn)品質(zhì)量,開(kāi)發(fā)穩(wěn)定細(xì)胞株的過(guò)程包括:
  宿主細(xì)胞的選擇,表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染,單克隆化以及高表達(dá)細(xì)胞株的篩選。目前大部分的抗體藥物都是選用的CHO細(xì)胞,但原始CHO細(xì)胞系流轉(zhuǎn)到不同的實(shí)驗(yàn)室和公司,經(jīng)過(guò)不同的培養(yǎng)、馴化、改造和重新克隆后形成了不同種類(lèi)的CHO細(xì)胞系。這些不同CHO細(xì)胞系之間的形態(tài)、生長(zhǎng)、表達(dá)、代謝,甚至基因組都有較大差異。宿主細(xì)胞的選擇除了考慮研發(fā)周期、成本以及后期整體的生產(chǎn)成本,還需要有清晰的歷史背景信息。
  表達(dá)載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染開(kāi)始是指將表達(dá)抗體的目的基因構(gòu)建到載體上,再將該載體轉(zhuǎn)染進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)。常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有磷酸鈣法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法、病毒轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。沒(méi)有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn),需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇。理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率、低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響小,并且易于使用和具有可重復(fù)性等特點(diǎn),所以在正式開(kāi)展轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前還要做多項(xiàng)預(yù)試驗(yàn),優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
  篩選高表達(dá)單克隆細(xì)胞株是細(xì)胞株構(gòu)建的關(guān)鍵步驟,衡量標(biāo)準(zhǔn)包括抗體表達(dá)量、產(chǎn)品的純度、翻譯后修飾、代謝穩(wěn)定性等。常用的篩選克隆的方法包括:有限稀釋法、流式細(xì)胞儀分選法、半固體培養(yǎng)基篩選法等。

 

 

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