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【基因編輯產(chǎn)品新品上市】MET Ex14 skipping新添成員

原載自：[技術(shù)資料頻道] 2023-02-15 瀏覽次數(shù)：657

Background

MET受體酪氨酸激酶是一種原癌基因，它的異常激活與腫瘤發(fā)生有關(guān)。各種潛在的機制，包括轉(zhuǎn)錄本中的改變、擴增、基因重排和外顯子跳躍，都是MET信號異常的原因。MET導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的關(guān)鍵改變之一是MET外顯子14( MET Ex 14)跳躍，這是一種驅(qū)動突變，約占肺腺癌的3-4%。MET Ex14跳躍導(dǎo)致功能活躍且穩(wěn)定的截短受體的形成，該受體缺乏負(fù)責(zé)MET泛素化的近膜調(diào)節(jié)域。至今為止全球已經(jīng)開發(fā)了幾種針對MET受體的MET激酶抑制劑，其中許多正在進(jìn)行臨床試驗。

MET的結(jié)構(gòu)

MET基因位于人類基因組的7q31號染色體上，跨越約125kbDNA，包含21個外顯子和20個內(nèi)含子。MET被編碼為前體，通過其a和b亞基之間的蛋白水解切割被修飾成成熟蛋白質(zhì)。成熟的MET蛋白由一個小的a亞基(50kDa)和一個較大的b (145kDa)亞基組成，通過二硫鍵連接在一起。一個a亞基和b亞基的一部分共同構(gòu)成異二聚體蛋白的胞外區(qū)，而b亞基的其余部分構(gòu)成跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)。

MET的細(xì)胞外成分包含三個結(jié)構(gòu)域。N端Sema(Sema-phorin)是最大的結(jié)構(gòu)域，包含500個殘基，包含a和b亞基的一部分。該結(jié)構(gòu)域?qū)τ贛ET的配體結(jié)合、二聚化和激活至關(guān)重要。Sema結(jié)構(gòu)域之后是叢蛋白-信號蛋白-整合素(PSI)結(jié)構(gòu)域，包含四個二硫鍵，這對于配體結(jié)合受體的正確定位至關(guān)重要。PSI結(jié)構(gòu)域通過免疫球蛋白-叢蛋白-轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域連接到MET的跨膜螺旋。受體的細(xì)胞內(nèi)部分包括近膜(JM)結(jié)構(gòu)域、酪氨酸激酶(TK)催化結(jié)構(gòu)域和C末端多功能停靠位點。其配體肝細(xì)胞生長因子(HGF)（也稱為分散因子）的結(jié)合對于激活激酶活性至關(guān)重要。HGF是迄今為止已知的MET受體配體，并以高親和力與受體結(jié)合。

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Fig1.MET蛋白的結(jié)構(gòu)

MET Ex14跳躍的機理

HGF與MET結(jié)合導(dǎo)致受體二聚化，導(dǎo)致激酶結(jié)構(gòu)域中細(xì)胞內(nèi)殘基Y1234和Y1235自磷酸化，隨后在激酶結(jié)構(gòu)域外的C端磷酸化另外兩個酪氨酸殘基Y1349和Y1356。C末端殘基的磷酸化導(dǎo)致對接位點的形成，隨后銜接子和效應(yīng)蛋白，如GRB2（生長因子受體結(jié)合蛋白2）、GAB1（GRB2相關(guān)結(jié)合蛋白1）和SHC（含Src同源2結(jié)構(gòu)域），與?？课稽c結(jié)合，觸發(fā)下游信號傳導(dǎo)。

2005年報道了NSCLC中MET Ex14的跳躍。內(nèi)含子13的3' 剪接位點或內(nèi)含子14的5 '末端剪接位點的替換或缺失導(dǎo)致MET Ex14跳躍。在MET Ex14的剪接點處或剪接點附近發(fā)生的這種體細(xì)胞改變導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄物中外顯子14的丟失和MET蛋白的合成以及JM結(jié)構(gòu)域中47個氨基酸的框內(nèi)缺失（包括殘基Y1003)消融CBL介導(dǎo)的受體泛素化和降解。因此，MET Ex14跳躍導(dǎo)致MET蛋白水平升高，這可以驅(qū)動促進(jìn)腫瘤發(fā)展的下游信號通路的激活。

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Fig 2. MET Ex14跳躍的機理

MET Ex14跳躍的突變

根據(jù)文獻(xiàn)報告，在非小細(xì)胞肺癌中常見的導(dǎo)致MET Ex14跳躍的突變有如下幾種：

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Fig 3. 常見導(dǎo)致MET Ex14跳躍的突變

同時在眾多的其他癌種中也發(fā)現(xiàn)很多，大約 3–4% 的 NSCLC 具有MET Ex14改變。在組織學(xué)亞型中， MET Ex14跳躍改變常見于肉瘤樣癌 (4.9–31%)，69–72腺鱗癌 (4–8%)、腺癌 (3–4%) 和鱗狀細(xì)胞癌 (2%)。此外，在腺癌中，主要的亞型是腺泡型 (35-52.9%) 或?qū)嵭詠喰?(35.3-53%)。臨床上， METEx14跳躍異常多見于高齡患者。

MET Ex14跳躍的檢測

一般而言，基于DNA和RNA的分子檢測是檢測METex14改變的方法?；贒NA的測序分析可以檢測MET改變，例如剪接位點的插入、缺失、點突變或重復(fù)，這些改變可能導(dǎo)致外顯子14跳躍。然而，METEx14跳躍與剪接位點中超過120個報告的序列變異有關(guān)，這使得僅使用基于DNA的檢測來檢測這些突變具有挑戰(zhàn)性。因此，對RNA轉(zhuǎn)錄本的分析可以驗證外顯子13和15之間的融合。在理想情況下，基于DNA和RNA的檢測可相互補充，以可靠地檢測METEx14改變。

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