人結(jié)腸癌細(xì)胞株的復(fù)蘇,遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37.5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，約5ml左右，然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
　　人結(jié)腸癌細(xì)胞株前期需要準(zhǔn)備：
　　1.構(gòu)建好的外源基因載體
　　2.待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（1×106個(gè)細(xì)胞，可傳代，倍增時(shí)間小于48小時(shí)）以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說(shuō)明
　　3.若需要檢測(cè)靶基因的表達(dá)變化，請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)抗體
　　收到人結(jié)腸癌細(xì)胞株后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
　?。ㄒ唬┤绻?xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
　　(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
　　1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
　　2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。
　　3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。
　　人結(jié)腸癌細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
　　1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
　　2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
　　3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
　　4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
　　5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。