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腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨初代培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基的要求

原載自:m.diomay.cn[行情動(dòng)態(tài)]  2015-12-25  瀏覽次數(shù):1923

   腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨對(duì)培養(yǎng)基的要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格,一般常用的 RPMIl640、 DMEM、Mc-Coy等培養(yǎng)基等皆可用于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。腫瘤細(xì)胞對(duì)血清的需求比正常細(xì)胞低,正常細(xì)胞培養(yǎng)不加血清不能生長(zhǎng),腫瘤細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中也能生長(zhǎng)。腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨對(duì)培養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)性較大,是因腫瘤細(xì)胞有自泌性產(chǎn)生促生長(zhǎng)物質(zhì)之故。但這并不說(shuō)明腫瘤細(xì)胞*不需要這些成分。按不同細(xì)胞需要不同的生長(zhǎng)因子;腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨與正常細(xì)胞之間、腫瘤細(xì)胞之間對(duì)生長(zhǎng)因子的需求都存在著差異。但大多數(shù)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中仍需要生長(zhǎng)因子。有的還需特異性生長(zhǎng)因子〔如乳腺癌細(xì)胞等)??傊囵B(yǎng)腫瘤細(xì)胞仍需加血清和相關(guān)生長(zhǎng)因子培養(yǎng)更易成功。
  腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨與體內(nèi)正常細(xì)胞相比,不論在體內(nèi)或在體外,在形態(tài)、生長(zhǎng)增值、遺傳性狀等方面都有顯著的不同。生長(zhǎng)在體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞和在體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞,其差異較小,但也并非*相同。培養(yǎng)中的腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨具以下突出特點(diǎn):
 ?。ǎ┬螒B(tài)和性狀
  培養(yǎng)中癌細(xì)胞無(wú)光學(xué)顯微鏡下特異形態(tài),大多數(shù)腫瘤細(xì)胞鏡下觀察比二倍體細(xì)胞清晰,核膜、核仁輪廓明顯,核糖體顆粒豐富。電鏡觀察癌細(xì)胞表面的微絨毛多而細(xì)密,微絲走行不如正常細(xì)胞規(guī)則,可能與腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨具有不定向運(yùn)動(dòng)和錨著不依賴性有關(guān)。
 ?。ǘ┥L(zhǎng)增殖
  腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨在體內(nèi)具有不受控增殖性,在體外培養(yǎng)中仍如此。正常二倍體細(xì)胞在體外培養(yǎng)中不加血清不能增殖,是因血清中含有很細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的因子,而癌細(xì)胞在低血清中(2%~5%)仍能生長(zhǎng)。已證明腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨有自泌或內(nèi)泌性產(chǎn)生促增殖因子能力。正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化后,出現(xiàn)能在低血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的現(xiàn)象,已成為檢測(cè)細(xì)胞惡變的一個(gè)指標(biāo)。癌細(xì)胞或培養(yǎng)中發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化后的單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),形成集落(克隆)的能力比正常細(xì)胞強(qiáng)。另外癌細(xì)胞增殖數(shù)量增多擴(kuò)展時(shí),接觸抑制消除,細(xì)胞能相互重疊向三維空間發(fā)展,形成堆積物。
 ?。ㄈ┯郎?/div>
  永生性也稱不死性。在體外培養(yǎng)中表現(xiàn)為細(xì)胞可無(wú)限傳代而不凋亡(Apoptosis)。體外培養(yǎng)中的腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨系或細(xì)胞株都表現(xiàn)有這種性狀,體內(nèi)腫瘤細(xì)胞是否如此尚無(wú)直接證明。因惡性腫瘤終將殺死宿主并同歸于盡,從而難以證明這一性狀的存在。體外腫癌細(xì)胞的永生性是否能反證它在體內(nèi)時(shí)同樣如此?也尚難肯定。從近年建立細(xì)胞系或株的過(guò)程說(shuō)明,如果永生性是體內(nèi)腫瘤細(xì)胞所固有的,腫瘤細(xì)胞應(yīng)易于培養(yǎng)。事實(shí)上,多數(shù)腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨初代培養(yǎng)時(shí)并不那么容易。生長(zhǎng)增殖并不旺盛;經(jīng)過(guò)純化成單一化瘤細(xì)胞后,也大多增殖若干代后,便出現(xiàn)類似二倍體細(xì)胞培養(yǎng)中的停滯期。過(guò)此階段后才獲得永生性,順利傳代生長(zhǎng)下去。從而說(shuō)明體外腫瘤細(xì)胞的永生性有可能是體外培養(yǎng)后獲得的。從一些具有永生性而無(wú)惡性性的細(xì)胞系,如NIH3T3、Rat-1、10T1/2等細(xì)胞證明,永生性和惡性(包括浸潤(rùn)性)是兩種性狀,受不同基因調(diào)控,但卻有相關(guān)性。可能永生性是細(xì)胞惡變的階段。至少在體外是如此。
  為提高腫瘤細(xì)胞現(xiàn)貨對(duì)體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞(干細(xì)胞)的數(shù)量,可采用動(dòng)物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后,再?gòu)膭?dòng)物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng),能提高體外培養(yǎng)的成功率。
 

 

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